一步法試劑盒使逆轉錄和qPCR兩種反應在同一管中進行，只需要加入模板RNA、特異性PCR引物和RNase-Free ddH2O即可。
試劑盒可以快速、高效的對病毒RNA或微量RNA進行定量分析
試劑盒使用獨特的Foregene反轉錄試劑和Foregene HotStar Taq DNA Polymerase相結合，并配合獨特的反應體系，有效提高反應的擴增效率和特異性。
優化的反應體系使得反應具有更高的檢測靈敏性，更強的熱穩定性，更好的耐受性。
RT-qPCR EasyTM (One Step)-SYBR Green I試劑盒附帶有ROX內參染料，可用于消除信號本底及孔間信號誤差，方便客戶用于不同型號的定量PCR儀。
產 品 名 稱 | 一步法RT-qPCR試劑盒-SYBR Green I RT-qPCR EasyTM (One Step)-SYBR Green I | ||
貨 號 | RT-02111 | RT-02112 | |
規 格 | 100 × 20 μL rxns | 500 × 20 μL rxns | |
價 格 | ￥1,213.00 | ￥4,854.00 | |
| 描 述 | 獨特的體系使得 RT 和 Real Time PCR 反應有效的結合起來， 能快速的完成基因的定量檢測。 | ||
產品介紹
RT-qPCR EasyTM (One Step)-SYBR Green I采用獨特的體系使RT和Real Time PCR反應有效的結合起來，能快速的完成基因的定量檢測。該產品具有很強的耐受性，高特異性和穩定性。產品包含了本公司特有的Foregene HotStar Taq DNA Polymerase，該酶相對于普通Taq酶具有擴增速度快(2Kb/min)、擴增效率高、特異性擴增能力強、錯配率低等優點。在此用于Real Time RT-PCR可減少非特異性擴增，提高PCR的準確性。
試劑盒應用
v 可以快速、準確地對RNA病毒等微量RNA進行分析。
v 特別適合對高GC含量或具有復雜二級結構的RNA模板進行分析。
儲存條件
試劑盒避光保存于-20℃。產品收到后立即存放于-20℃恒溫冰箱中。如果存儲條件適當，產品在1年有效期內不會降低任何性能。
劑盒內容
2× RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR：Foregene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、Foregene HotStar Taq DNAPolymerase、優化配比的dNTPs、SYBR GreenI、Mg2+、穩定劑、增強劑、優化劑。
ROX Reference Dye：一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR擴增儀上，用于調整PCR加樣誤差所引起的 PCR管與管之間的差異。不同儀器所需ROX ReferenceDye濃度不同，用戶可以根據儀器的推薦濃度添加。
Foregene Reverse Transcriptase
Foregene逆轉錄酶能夠提供高效、特異性強的逆轉錄反應。逆轉錄酶表現出很高的親和力，并在 50°C反應溫度條件下仍然保持良好的逆轉錄活性，能夠很好的逆轉錄其他逆轉錄酶不能處理的二級結構復雜的RNA。Foregene Reverse Transcriptase 靈敏度高，使用的RNA 量范圍廣泛(0.1pg≤RNA≤1μg) 。
Foregene HotStar Taq DNA Polymerase
提供了PCR的高度特異性擴增。反轉錄進行時，DNA聚合酶是完全無效的，不妨礙反轉錄反應。后通過PCR反應程序，加熱到94°C，激活DNA聚合酶同時，失活逆轉錄酶。熱啟動過程消除了第一個循環時非特異性退火的引物和引物二聚體的形成，保證PCR擴增的高度特異性和可靠性。
RNA模板濃度
(0.1pg-100ng total RNA)/20μL 體系
說明書
產品文獻
MSDS
COA
RT-PCR未出現目的片段
Answer
1. 模板RNA被降解
建議：使用新鮮樣品提取，應用高質量高純的RNA(建議使用Foregene Total RNA Isolation Kit系列提取純化RNA)；-80℃儲存的RNA應避免反復凍融。
2. RNA含有抑制劑
建議：逆轉錄抑制劑一般包括SDS、胍鹽、EDTA等，建議通過70%的乙醇對RNA沉淀進行清洗，除去抑制劑；或使用Foregene Total RNA Isolation Kit系列提取純化RNA。
3. 引物設計問題
建議：按照引物設計原則，重新設計引物進行檢查。
出現引物二聚體或非特異性擴增
Answer
1. RNA中有基因組DNA污染。
建議：使用擴增級的DNase I進行處理，設置沒有逆轉錄的對照檢測DNA污染。
2. Mg2+濃度不適合。
建議：我們提供的Mix中Mg2+濃度為3.5 mM。但針對有些特殊引物和模板可能需要較高濃度的Mg2+，因此可直接添加MgCl2進行Mg2+濃度的優化，建議每次增加0.5mM的Mg2+進行優化。
3. PCR退火溫度過低。
建議：對引物做梯度PCR，選擇合適的退火溫度。
4. PCR產物太長。
建議：熒光定量PCR產物長度最好在100-300bp之間。
5. 引物出現降解，引物降解會導致非特異性擴增出現。
建議：可使用SDS-PAGE電泳檢測引物是否降解，更換新的引物進行實驗。
6. PCR體系不當，或體系太小。
建議：PCR反應體系太小會導致檢測精度降低。最好使用定量PCR儀推薦的反應體系重新進行實驗。
7. PCR循環數過多。
建議：適當降低PCR循環次數。
無擴增信號
Answer
1. 試劑盒保存不當導致SYBR Green I失效或者試劑盒過期導致SYBR Green I熒光信號丟失。
建議：2× RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR試劑要-20℃避光保存，且避免反復凍融。
2. RNA模板中存在大量酶抑制因子。
建議：重新純化模板或降低模板的使用量。
3. PCR擴增條件不適合、引物序列或者濃度不當。
建議：確認引物序列的正確性以及引物沒有降解；擴增信號不好時，可嘗試降低退火溫度，適當調整引物濃度等。
4. 模板用量問題，太少或過多。
建議：可進行模板線性化梯度稀釋，選擇PCR效果最好的模板濃度進行熒光定量實驗。
負對照出現過高的熒光值
Answer
1. 在操作過程中導致的試劑污染。
建議：更換新的試劑進行RT-qPCR實驗。
2. PCR反應體系配制時發生污染。
建議：操作時進行必要的防護措施，比如：戴乳膠手套，使用帶濾芯的槍頭等。
3. 引物出現降解，引物降解會導致非特異性擴增出現。
建議：可使用SDS-PAGE電泳檢測引物是否降解，更換新的引物進行RT-PCR實驗。
本產品是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉錄體系。5× gDNase Mix能在42°C，2min快速去除RNA中殘留的基因組，有效的避免了基因組對qPCR結果的干擾。
本產品是專門為Real Time PCR研制的逆轉錄體系，預混優化配比的反轉錄引物（Oligo(dT)引物和隨機引物），無需單獨添加。
本產品是專門為LncRNA研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉錄體系。
