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鼠尾直接PCR試劑盒—防PCR產物污染體系

無需進行費時而昂貴的DNA純化。

樣品需求量小,少到5mg小鼠組織或2-5mm鼠尾即可進行實驗。

無需研磨、破碎等特殊處理,操作簡便。

優化的PCR體系,使PCR具有更高的特異性、更強的PCR反應抑制物耐受性。

防污染PCR體系2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG),有效消除由PCR產物所引起的污染,保證擴增的特異性和準確性。

產 品 名 稱

鼠尾直接PCR試劑盒-防PCR產物污染體系

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG

貨    號

TP-01341

TP-01343

規    格

200 T

2000 T

價    格

1,114.00

7,525.00

描    述

快速的從鼠尾、小鼠組織樣本中釋放出基因組DNA,用于PCR反應,適合快速大規模基因檢測增加了UNG防污染體系,杜絕假陽性

試劑盒包含裂解液/PCR Mix

產品介紹

本產品采用獨特的裂解緩沖液體系可以快速的從小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等組織樣本中釋放出基因組DNA,用于PCR反應,因此特別適合大規模基因檢測。

裂解緩沖液釋放基因組DNA過程在65條件下10-30 min內完成,不需要其他去蛋白、RNA等的過程,即可將釋放出的微量DNA作為模板進行PCR反應。

2× M1-PCR EasyTM Mix具有很強的PCR反應抑制物耐受性,能以待測樣本的裂解液為模板,進行高效特異性擴增。該試劑包含Foregene D-Taq DNAPolymerasedNTPsMgCl2、反應緩沖液、PCR優化劑和穩定劑。與裂解緩沖液配合使用能夠快速簡便地對樣品進行檢測,并具有靈敏度高、特異性強、穩定性好等特點。

2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)2× PCR EasyTM Mix的基礎上用dUTP替代了dTTP,并同時加入能夠降解含有dUTP模板UNG(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反應前,利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR產物,UNG酶對不含有尿嘧啶的模板不會造成任何影響,從而保證擴增的特異性和準確性,防止了大規模基因檢測時可能出現的PCR產物污染問題。

D-Taq DNA polymeraseForegene為直接PCR反應專門研制出的DNA polymeraseD-Taq DNA polymerase對多種PCR反應抑制劑具有極強的的耐受性、在各種復雜反應體系中均能高效擴增痕量的DNA,擴增速度可達2Kb/min,特別適合進行直接PCR反應。


試劑盒應用

適用范圍:小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等組織

樣本裂解釋放的DNA:僅用作PCR模板。

試劑盒可用于以下用途:轉基因型鑒定、動物基因分型等。



試劑盒局限性

擴增片段≤1kb;超過1kb,擴增效率下降或者擴增失敗。

UNGPCR產物污染體系得到的PCR產物請勿用于基因克隆或測序。

PCR產物3’末端隨機加A尾。

試劑盒內容

Buffer MP提供小鼠組織裂解反應所需的環境。

Foregene Protease Plus在裂解緩沖液的環境下,裂解鼠尾或小鼠組織,釋放基因組DNA

2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG):在2× M1-PCR EasyTMMix的基礎上用dUTP替代了dTTP,并同時加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶,從而能夠有效防止PCR擴增產物污染。包含福際生物特別改造的D-Taq DNA PolymeraseUDGdNTPsMgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優化劑以及穩定劑等。PCR反應時,只需將適當的裂解混合液、引物、ddH2O添加到2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)中即可用于PCR反應。

6× DNA Loading BufferLoading Buffer中不含有SDS。建議在進行瓊脂糖凝膠電泳時,配搭使用試劑盒附贈的6× DNA Loading Buffer,以便取得好的電泳結果。切勿使用含有SDSLoading Buffer,否則在電泳時會在泳道中有一大團拖尾亮光,影響實驗結果。


儲存條件

全程低溫冰盒運輸,保證試劑盒Part IPart II處于<4狀態。

本試劑盒Part I保存在2-8

v 試劑Buffer MP,在干燥條件下,可保存12個月;如需保存更長時間可置于2–8

v  試劑Foregene Protease Plus,具有獨特配方,為保證其活性和穩定性,請保存于4,保存時間為12個月。

v  試劑6× DNA Loading Buffer,可置于4-20長期保存。

本試劑盒Part II保存在-20

v  試劑2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG),在-20條件下可保存12個月;若頻繁使用,也可置于4短期保存(10天內用完)


操作流程

鼠尾直接



  • 正對照、待測樣本均無條帶

    Answer

    在試劑盒的使用過程中往往會遇到許多問題,比如:沒有PCR擴增產物、PCR特異性差等,以下就分別對使用鼠尾直接PCR系列試劑盒可能會遇到的問題進行分析。建議在進行直接PCR的同時設置陽性對照或陰性對照以便后續分析實驗結果。

    1.    PCR反應體系或反應條件不合適。

    建議:使用梯度PCR摸索PCR最佳反應條件。

    2.   PCR試劑保存不當失去活性。

    建議:2× PCR Mix應保存于-20,使用時避免反復凍融。若使用頻繁,可在4短時間存放。

    3.    引物設計問題。

    建議:嘗試重新設計引物進行檢查。


  • 正對照有目的條帶,待測樣本無條帶或條帶弱

    Answer

    1.    PCR條件沒有使用正確。

    建議:請仔細確認2× PCR Mix的類型,對應相應的PCR條件進行PCR擴增。

    2.    加入組織裂解液過量。

    建議:增大反應體系,或減少裂解液的用量。

    3.    樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久,DNA基因組已經降解。

    建議:裂解混合液液可在4保存2-3天,盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR

    4.    模板加入量不適合。

    建議:在反應體系10-20%范圍內優化模板加入量。反應效性能較差時,可以降模板濃度調節到低于10%的范圍。

    5.    PCR循環數不足。

    建議:適當增加PCR的循環數,推薦在35-40循環為佳。因為模板復雜,一般PCR反應要比用純化的DNA模板多5-10個循環為佳。


  • 非特異性擴增

    Answer

    1.    退火溫度偏低

    建議:適當提高退火溫度。或對退火溫度做一個梯度摸索。

    2.    PCR循環數過多。

    建議:適當降低循環次數,推薦在35-40循環為佳。

    3.    引物濃度偏高。

    建議:適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結果。反應性能較差時,可以在0.1-0.5μM范圍內調整引物濃度。

    4.    模板加入量過多。

    建議:將模板加入量控制在10-20%。反應效性能較差時,可以降模板濃度調節到低于10%的范圍。


  • 空白對照出現目的條帶

    Answer

    1.    操作工具或試劑污染。

    建議:實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。

    2.    樣本間交叉污染。

    建議:每個取樣器只對一個樣本使用;或取完一個樣本后,將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中,反復涮洗,然后用干凈的紙巾擦干殘液。

    3.    PCR產物污染。

    建議:如果實驗室檢測同類型樣本多,最好使用UNGPCR產物污染系統的試劑盒進行實驗。


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